血液肿瘤FISH检测判读建议(三): 基因缺失

血液肿瘤可能会出现不同基因或染色体片段的缺失，如MDS（骨髓增生异常综合症）和AML（急性粒细胞白血病）可能出现5q-、7q-和20q-，CML（慢性粒细胞白血病）可能出现ASS基因缺失，慢性淋巴细胞白血病可能出现13q-、P53和ATM基因缺失，MM（多发性骨髓瘤）可能出现13q-和P53基因缺失等等。这些染色体片段和基因的缺失，FISH检测探针为某个染色体片段（几百kb长），可能会设置相应的着丝粒探针或区域片段探针作为对照。

以7q基因缺失检测探针（用于7q-的检测，含GSP D7S486和CSP7两个探针，CSP7为对照）和MM组合试剂盒中的P53/D13S319杂交液（用于P53基因和D13S319片段缺失的检测，即检测17p-和13q-，含有GSP P53和GSP D13S319两个探针，都具有检测意义）为例。

1、7q缺失检测探针（含对照，判读可类推5q-、6q-、P53和ATM等基因缺失检测探针）

①探针设计：D7S486标红色，CSP17（17号着丝粒探针）标绿色

②正常信号细胞：2红2绿

典型异常（阳性）信号细胞：1红2绿（7号染色体长臂缺失），1红1绿（整个7号染色体缺失，当然长臂也缺失）

③阈值设定：随机选取10 例以上的正常骨髓细胞涂片或者正常外周血细胞涂片当阴性质控片，每张阴性质控片随机计数200 个细胞，分别计算出现各类型FISH 阳性细胞的数目及百分比，统计百分比的平均值及标准差，阴性阈值设定为平均值+3 倍标准差。

④计数判读：计数200 个细胞，出现2红2绿信号类型的细胞记为FISH 阴性细胞，出现1红2绿或1红1绿信号类型的细胞记为FISH 阳性细胞

a) 若出现FISH 阳性细胞的比例大于阴性阈值时，判断为FISH 阳性；

b) 若出现FISH 阳性细胞的比例小于阴性阈值时，判断为FISH 阴性；

c) 若出现FISH 阳性细胞的比例等于阴性阈值时，应加大计数数目或分析整张片子（≥500个细胞），如果仍小于或等于阴性阈值，视为FISH 阴性；否则视为FISH 阳性。

⑤计数及判读注意：

a) 若无特殊情况，计数时只计数2G2O、2G1O和1G1O的信号；

b) 若有特殊情况，某一特殊信号出现比例20%以上，最好查阅文献或相关材料验证；

c) 红绿信号都出现的方可统计，若出现大比例（20%以上）没有红色或没有绿色或两者都无的情况，可能是样本或实验条件影响，最好用杂交信号很好的样本行对照再做。

⑥举例：计数时同一信号类型的细胞可用“正”计数表示（温馨提示：为提高效率，针对常见信号类型和阴性细胞可用计数器进行计数，而不常见或类型较少用正号记录）

计数情况：

信号类型

细胞个数

统计

2G2O

正正正正正正正正正正正

55

2G1O

正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正

150

1G1O

一

1

结果：

2G1O阳性细胞比例=150/（55+150+1）=72.8%，大于阈值，7q-阳性

1G1O阳性细胞比例=1/（55+150+1）=0.5%，小于阈值，-7阴性

此例样本为7q-阳性

⑦阈值参考：参考文献，阈值6%。

2.、P53/D13S319杂交液（MM组合试剂盒的杂交液I，两个探针都有检测意义，可类推MDS组合试剂盒的CSP12/D20S108、MM的RB1/1q21等探针）

①探针设计：GSP P53标绿色，GSPD13S319标红色，判读时红绿单独计数

②正常信号细胞：2G2O

典型异常（阳性）信号细胞：1G2O（P53缺失，D13S319正常），2G1O（P53正常，D13S319缺失），1G1O（P53和D13S319都缺失）

③阈值设定：随机选取10 例以上的正常骨髓细胞涂片或者正常外周血细胞涂片当阴性质控片，每张阴性质控片随机计数200 个细胞，分别计算出现各类型FISH 阳性细胞的数目及百分比，统计百分比的平均值及标准差，阴性阈值设定为平均值+3 倍标准差。

④计数判读：计数200 个细胞，出现2红2绿信号类型的细胞记为FISH 阴性细胞，出现1绿n红的计为P53缺失的FISH阳性细胞，n绿1红的计为D13S319缺失FISH 阳性细胞

a) 若出现FISH 阳性细胞的比例大于阴性阈值时，判断为FISH 阳性；

b) 若出现FISH 阳性细胞的比例小于阴性阈值时，判断为FISH 阴性；

c) 若出现FISH 阳性细胞的比例等于阴性阈值时，应加大计数数目或分析整张片子（≥500个细胞），如果仍小于或等于阴性阈值，视为FISH 阴性；否则视为FISH 阳性。

⑤计数及判读注意：

a) 若无特殊情况，计数时只计数2G2O、1G2O、2G1O和1G1O的信号；

b) 若有特殊情况，某一特殊信号出现比例20%以上，最好查阅文献或相关材料验证（P53可能会扩增）；

c) 红绿信号都出现的方可统计，若出现大比例（20%以上）没有红色或没有绿色或两者都无的情况，可能是样本或实验条件影响，最好用杂交信号很好的样本行对照再做。

⑥举例：计数时同一信号类型的细胞可用“正”计数表示（温馨提示：为提高效率，针对常见信号类型和阴性细胞可用计数器进行计数，而不常见或类型较少用正号记录）

计数情况：

信号类型

细胞个数

统计

2G2O

正正正正正正正正正正正

55

1G2O

正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正

150

2G1O

一

1

1G1O

一

1

结果：

1GnO的阳性细胞比例=（150+1）/（55+150+1+1）=72.9%，P53缺失阳性

nG1O的阳性细胞比例=（1）/（55+150+1+1）=0.5%，D13S319缺失阴性

此例样本为P53缺失，D13S319正常

⑦阈值参考：参考文献，阈值6%。

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