灵芝多糖抗肿瘤作用的探讨

文章编号: 10052376X () 0620335202 【论著】

宁安红1， 孙晓东2, 曹婧1, 黄敏1

(1. 大连医科大学微生物学教研室, 辽宁大连116027; 2. 大连武警医院, 辽宁大连 116013)

关键词: 灵芝多糖; 小鼠肿瘤; 生存期

肿瘤目前仍是临床难以治疗的疾病之一, 对人类的健康有很大危害, 现在临床治疗肿瘤的主要方法是手术、化疗、放疗, 一方面给病人带来生存的希望, 同时也给病人带来较大创伤。化疗、放疗副作用较大, 使病人恢复的较慢, 多年来众多学者一直在寻找副作用小的抗癌药物。灵芝[Ganoderm a L ucidum(L eyss ExFr) Karst ] 是担子菌纲多孔科灵芝属真菌, 有赤芝、紫芝、薄树芝、白芝等品种, 其中赤芝是最常用的灵芝属真菌之一。灵芝是我国传统的补益中药, 具有滋补壮身、扶正固本、延年益寿之功效。现代研究表明灵芝多糖是灵芝的主要活性成分之一,灵芝多糖具有抗肿瘤及免疫调节作用[123]。在对其抗肿瘤作用的系统研究中发现, 灵芝多糖能够增强巨噬细胞的吞噬功能, 促进淋巴细胞增殖, 增强T 杀伤细胞的细胞毒作用, 促进细胞因子如白介素及肿瘤坏死因子的生成及其表达。本实验所用灵芝多糖是从黄敏教授研制开发的灵芝菌丝体发酵液中提取的, 与传统灵芝多糖提取法相比具有生产时间短、费用少等特点。本实验对灵芝多糖抗肿瘤作用做了初步研究, 现报告如下。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物小鼠

1.1.2灵芝多糖赤芝菌株

1.1.3瘤株S180 (小鼠肉瘤细胞)、H22 (小鼠腹水型肝癌CAF16A3细胞) 、U 14 (小鼠腹水型宫颈癌细胞) , 均由本校微生物教研室提供。

1.1.4主要试剂与仪器RPM I-1640; Sigm a 产四甲基偶唑蓝(MTT ) ; F luka 产PCH2100 电脑CO 2孵育培养箱;小牛血清。

1.2实验方法

1.2.1灵芝多糖对荷瘤小鼠生存期的影响取冻存的S180瘤株, 在小鼠腹腔传代3次, 抽取第4代生长最佳状态的细胞, 用胎盼蓝巨染, 细胞成活率在95%以上, 按细胞数1×106/ml, 012ml/只小鼠腹腔注射, 24h后随机分组。灵芝多糖组每只腹腔注射1mg/ml 的灵芝多糖1.0 m l/只, 每天1次, 连续7d;生理盐水(NS) 组注射无菌生理盐水, 途径、剂量、方法、次数同灵芝多糖组。观察小鼠生存期。

U 14瘤株组方法、途径、剂量、次数等完全同S180瘤株组。

1.2.2灵芝多糖体外直接细胞毒作用测定分别取冻存的S180、H22、U 14瘤株, 在体外用RPM I-1640全培养基进行细胞培养, 当生长繁殖处于最佳状态时, 离心, 用RPM I-1640 全培养基调细胞浓度为1×105/m l, 分别加于24 孔培养板上, 每孔0.9m l, 然后实验组每孔加入灵芝多糖0.1 m l, 阴性对照组每孔加入生理盐水0.1 ml, 阳性对照孔每孔加入环磷酰胺0.1 ml (终浓度为500 Lg/ml) , 置于37℃ CO2孵育培养箱中培养, 分别于24h、48h、72h 进行台盼蓝拒染计数各组瘤细胞总细胞数、死亡细胞数, 计算抑瘤率。

2结果

2.1灵芝多糖腹水型荷瘤小鼠生存期的影响

结果表明灵芝多糖能够显著延长荷瘤小鼠生存时间, 灵芝多糖组小鼠生存期显著延长(P < 0.05)。

3讨论

肿瘤是严重危害人类生命的疾病之一, 其死亡率居高不下, 为了与肿瘤作斗争, 各国科学家进行了长期不懈的努力。近年来, 从真菌及其代谢产物中提取有效成分抗肿瘤的研究日益得到人们的重视, 而且其抗肿瘤活性已得到国际公认。灵芝作为一种传统的中药, 自古以来就为人们广泛应用, 灵芝多糖是灵芝的有效活性成分之一, 本实验提取灵芝菌丝体发酵液中的灵芝多糖, 进行体内外抗肿瘤实验, 得到令人较满意的效果。

灵芝多糖能明显延长S180、U 14腹水型荷瘤小鼠生存期, 延长荷瘤小鼠的生命, 说明灵芝多糖对于治疗肿瘤具有一定的疗效。而其在体外实验中对肿瘤细胞无直接杀伤作用, 提示灵芝多糖的抑制肿瘤作用可能是通过机体介导的。灵芝多糖对机体的免疫作用是我们下一步实验要证实的。由于本实验所用的灵芝多糖是用生物工程法从黄敏教授研制开发的灵芝菌丝体发酵液中提取的, 较从灵芝子实体中提取具有生产周期短、费用低等特点, 相信灵芝多糖不久将造福于人类。

参考文献:

[ 1 ]林志彬主编. 灵芝的现代研究[M]1 北京: 北京大学中国协和医科大学联合出版社,1996.135-140.

[ 2 ]L ei L S, L in ZB1Effects of Ganoderma Po lysaccharides on T cellsubpopulations and p rduction of interleuk in 2 inm ixedlymphocyte response[J]1A cta Pham Sin, 1992, 27 (5) : 331-335.

[ 3 ]L ei L S, L in ZB1Efects of Ganoderma po lysaccharides on theactivity of DNA po lymerase in sp leen cells stimulated byalloantigens in m ice in vit [J]1J BeijingM ed U niv, 1991, 23 (4) :329-333.

[ 4 ]张群豪, 林志彬1 灵芝多糖对肿瘤坏死因子a 和干扰素r 产生及其RNA 表达的影响[J]1 北京医科大学学报, 1999, 31 (2) : 179-183.

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