导读
近日,中华医学会儿科学分会临床检验学组组织编写的《儿童肺炎支原体呼吸道感染实验室诊断中国专家共识》(下称“共识”)已经见刊,其中详尽阐述了各种用于检测肺炎支原体(MP)感染的实验室方法相关内容。
共识意义在于规范了儿童呼吸道Mp感染的实验室诊断方法的类型、概念和价值,旨在根据患者现症和既往、门诊和住院、筛查和确诊等不同的感染情况选择不同的检测方法,结合患者临床症状、体征以及胸片等其他辅助检查,同时对患者年龄、全身状况、用药、病程等综合判断,为临床Mp感染的诊断提供合理、经济、高效的参考建议。
共识再次提出Mp是儿童社区获得性肺炎(community-acquired pneumonia,CAP)的重要病原体,可占CAP的10%~30%,Mp流行时可增加3~5倍。
同时共识指出,治疗Mp感染的首选药物大环内酯类抗菌药物耐药性已经接近100%,重症Mp肺炎治疗挑战性大,需要早诊断、早治疗,实验室病原学诊断是Mp感染诊断的关键。
共识对于不同检测方法应用的注意事项进行了如下阐述:
方法学
检测方法注意事项
病原学检测
1培养法
灵敏度差,特异性好,3~7 d培养,时间长,快速培养不符合MP生长时间建议确诊方法复测。
2肺炎支原体的直接检测
此类方法方便快捷,但易受人为因素干扰,如未取到感染细胞、没有选中合适的视野或其他病原及自身的交叉抗体干扰等,均会影响结果。
3分子生物学
3.1DNA检测技术
灵敏度和特异性都能满足临床需求。但是Mp死亡后其DNA仍可存在于部分患者体内,时间达7周~7个月,且不易降解,导致DNA检验结果不能很好地用于治疗效果的评估。
3.2RNA检测技术
由于RNA随病原体死亡而降解,可作为评价Mp感染转归、药物疗效的指标,其检测结果与Mp的感染严重程度相关性较好,因此Mp的RNA检测是目前早期快速诊断、判断疗效的最好方法之一。
血清学检测
ELISA
可以分型检测IgM、IgG等抗体亚型。但包被的Mp抗原来源多样,建议选择敏感度和特异度均较高的抗原包被试剂盒检测。
PA
患者血清Mp抗体滴度≥1:160作为Mp近期或急性感染的诊断标准;恢复期和急性期Mp抗体滴度呈4倍及以上增高或减低时,可确诊Mp感染。
GICT
定性试验,患者抗体含量较低时可能造成漏检,且抗体在部分治愈患者体内持续存在,使得对短期内再次感染的阳性判断造成困扰。
CLIA(化学发光法)
CLIA的原理是将发光物质直接标记在Mp抗原上(指直接化学发光原理试剂),或免疫复合物上的酶作用于发光底物(指酶促化学发光方法),通过大型发光仪测量光量子产额,定量、成批地检测Mp的IgM、IgG。
IFA
实验易受人为判断荧光结果影响,包被抗原含量不足可能会产生假阴性,体内含有类风湿因子、多种自身免疫性抗体等与包被抗原有交叉反应可能出现假阳性。
CFA
与其他检测方法相比,CFA采用糖脂抗原,特异性较差,操作过程中存在较多干扰,目前已经很少用于Mp临床诊断。
CAT
冷凝集素增高也可见于其他疾病,如流行性感冒、传染性单核细胞增多症、风疹等,故CAT的特异性差,现已逐渐被其他Mp的检测方法取代。
共识文件对实验室Mp血清学检测结果的判读进行了说明
方法
结果
判读指导
PA法
PA法滴度≥1∶160
提示近期或现症感染。
分型检测方法
IgM
IgA
IgG
+
-
-
近期感染
+
+
-
现症感染
-
-
+
既往感染
+
+
+
现症感染或近期感染
+
-
+
-
+
+
所有方法
间隔2~4周双份血清抗体亚型转化/血清抗体水平4倍及以上增加或降低确诊Mp感染
共识对MP检测的质量控制提出全面具体的要求
共识提出Mp检测的质量控制是获得准确可靠结果的前提,并对检验的质量控制从检验前、中、后质量控制三部分进行了阐述。在检验方法选择的建议上提出:病原学与血清学联合诊断仍然是目前提倡的Mp感染诊断策略
对病原学与血清学联合开展的结果分析建议
病原学检测结果
血清学检测结果
解释
+
+
基本可确诊为Mp感染。此类患者,发病时间多超过一周,抗体已经产生,后期进行疗效观察时可采用RNA检测。
+
-
基本可确诊为Mp早期感染。
其一,发病时间较短,抗体尚未产生;
其二,免疫系统发育不完善、免疫功能低下,未产生抗体或抗体滴度较低。抗体效价4倍变化可进一步确证Mp感染。
-
+
需依据抗体阳性类型和滴度来判断Mp的现症或既往感染,多为治疗后的既往感染。
-
-
Mp感染的可能性很小,需要进一步鉴别诊断时可监测抗体滴度或重新采样。
本次共识文件首次提出了清晰明确的Mp实验室诊断流程图,是本次共识的一项全新突破。
参考文献:中华医学会儿科学分会临床检验学组,中华检验医学杂志,,42(7):507-513
专家组成员:
(马丽娟、张泓、孙红妹执笔)
参与编写的专家(按姓氏汉语拼音排序):葛梦蕾(首都儿科研究所附属儿童医院检验中心);贾伟(宁夏医科大学总医院医学实验中心);江咏梅(四川大学华西第二医院检验科);蒋玉红(青岛市妇女儿童医院检验科);李贵霞(河北省儿童医院检验科);林书祥(天津市儿童医院儿科研究所);马丽娟(首都儿科研究所附属儿童医院检验中心);莫丽亚(湖南省儿童医院检验中心);渠巍(贵阳市妇幼保健院/贵阳市儿童医院检验科);尚世强(浙江大学医学院附属儿童医院实验检验中心);孙红妹(首都儿科研究所细菌研究室);杨铭华(哈尔滨市儿童医院检验科);张泓(上海交通大学附属儿童医院检验科);张乐海(山东大学齐鲁儿童医院科教外事科)。
参与征求意见的专家(按姓氏汉语拼音排列):陈红兵(南京医科大学附属儿童医院检验科);成玲(福建省妇幼保健院医院感染管理科);段荣(江西省儿童医院检验科);樊茂(昆明医科大学附属儿童医院检验科);傅启华(上海儿童医学中心检验科);黄晶(吉林大学第一医院检验科);马东礼(深圳市儿童医院检验科);马慧英(青海红十字医院检验科);强荣(西北妇女儿童医院医学遗传中心);阮强(中国医科大学附属盛京医院检验科);佘尚扬(广西壮族自治区妇幼保健院/儿童医院检验科);石磊(兰州大学第二医院/甘肃省儿童医院检验医学中心);宋文琪(国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院检验中心);孙立颖(北京大学第一医院检验科);田礼军(徐州市儿童医院检验科);王洁(海南省妇幼保健院/儿童医院检验科);翁莹(华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科);吴亦栋(杭州市儿童医院检验科);徐锦(复旦大学附属儿科医院临床检验中心);向赟(华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院检验科);杨治理(内蒙古自治区妇幼保健院/儿童医院/妇产医院检验科);张文利(乌鲁木齐儿童医院检验科);赵锐(山西省儿童医院检验科);赵晓明(郑州大学第一附属医院儿科实验室);张鹏辉(重庆医科大学附属儿童医院检验科);郑晓群(温州医科大学附属第二医院育英儿童医院检验科);周珍文(广州市妇女儿童医疗中心检验科);朱宏(苏州大学附属儿童医院检验科)。
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