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比卡鲁胺杂质化合物及其制备方法检测方法和应用与流程

时间：2022-01-26 10:50:01

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本发明涉及有机合成

技术领域：

，尤其是涉及一种比卡鲁胺杂质化合物及其制备方法、检测方法和应用。

背景技术：

：比卡鲁胺(bicalutamide)是由英国阿斯利康公司开发，1995年2月首先在英国上市，1995年9月获fda批准在美国上市，1999年在我国获准进口上市，商品名为康士得。目前已在70多个国家和市场上销售。该药物是新型非甾体类抗雄激素，可阻断肾上腺产生的雄性激素的作用，抑制雄性激素在细胞核受体部位上的结合或吸收，导致前列腺肿瘤萎缩。临床上用于治疗晚期前列腺癌，可避免雄激素治疗引起的不良反应。比卡鲁胺药物以其特异性强、耐受性好、半衰期较长，给药方便等优势广泛用于前列腺癌的治疗过程中。比卡鲁胺，化学名为为n-[4-氰基3-(三氟甲基)苯基]-3-[(4-氟苯基)磺酰基]-2-羟基-2-甲基丙酰胺，其结构如式(ii)所示：随着对比卡鲁胺合成工艺研究的不断深入，原料药合成相关的杂质，特别是对降解杂质的研究有助于提高比卡鲁胺原料药和制剂的质量标准和提升临床用药安全。在比卡鲁胺的制备方法中，大部分均使用了氧化条件将硫醚氧化成砜。双氧水作为绿色的氧化试剂，在比卡鲁胺原料药的生产中得到了应用。综合药典标准和文献报道，其中欧洲药典(版本9.0)报道的已知杂质有12种，但是关于氧化降解杂质却未见报道；或者在现有药典的检测条件下，并不能将部分杂质有效检出或被忽略。有鉴于此，特提出本发明。技术实现要素：本发明的第一目的在于提供一种比卡鲁胺杂质化合物，该杂质化合物能够作为比卡鲁胺质量研究中的杂质对照品使用。本发明的第二目的在于提供上述比卡鲁胺杂质化合物的制备方法，该制备方法操作简单，条件温和，制得的杂质化合物纯度高。本发明的第三目的在于提供上述比卡鲁胺杂质化合物的检测方法，提高响应值。本发明的第四目的在于提供上述比卡鲁胺杂质化合物作为标准品或对照品在比卡鲁胺和/或其制剂的质量控制中的应用。为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：比卡鲁胺杂质化合物，其结构式如式(i)所示：由于该比卡鲁胺杂质化合物的响应低，在美国药典标准的检测方法270nm波长下的校正因子为2.8，极容易被忽略因而难以被发现。本发明通过对比卡鲁胺降解杂质的研究，在反应过程中和酸、碱、氧化破坏等条件下得到比卡鲁胺杂质4-(3-((4-氟苯基)磺酰基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺基)-2-(三氟甲基)苯甲酰胺。例如，本发明发现，在采用双氧水对比卡鲁胺进行氧化破坏时，会产生该杂质化合物。这进一步说明了，在比卡鲁胺长期存放的情况下，可能会产生该杂质化合物。由于在比卡鲁胺的长期稳定性测试中，可能会存在该比卡鲁胺杂质，在比卡鲁胺长期稳定性检验过程中，如果对该比卡鲁胺杂质进行检测，能够进一步提高稳定性数据的可靠性。但采用现有检测方法，由于该化合物的校正因子为2.8，该杂质化合物无法被检出，或者由于量少被研究人员所忽略，因而并未将该化合物作为比卡鲁胺的杂质化合物以及将其对比卡鲁胺进行质量评价。该杂质的得到能够进一步满足比卡鲁胺质量研究需求，提升了比卡鲁胺原料药和制剂的质量标准，保证比卡鲁胺临床用药的安全性等。本发明还提供了上述比卡鲁胺杂质化合物的制备方法，包括如下步骤：在碱的作用下，比卡鲁胺与氧化剂混合反应。以比卡鲁胺作为起始物料，物料易得。且该方法操作简单，条件温和。在本发明一具体实施方式中，所述碱选自无机碱。可选的，所述无机碱可包括碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾和磷酸钾中的至少一种。可选的，所述无机碱与比卡鲁胺的摩尔比为1﹕(1～10)。如在不同实施方式中，所述无机碱与比卡鲁胺的摩尔比可以为1﹕1、1﹕2、1﹕3、1﹕4、1﹕5、1﹕6、1﹕7、1﹕8、1﹕9、1﹕10等等。可选的，所述无机碱与比卡鲁胺的摩尔比为1﹕(2～8)，进一步的可以为1﹕5。在本发明一具体实施方式中，所述混合反应的体系中还包括有机溶剂。优选的，所述有机溶剂包括非质子有机溶剂。可选的，所述非质子有机溶剂选自二甲基亚砜、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、丙酮中的至少一种。可选的，所述比卡鲁胺与所述有机溶剂的比例为1g﹕(1～30)ml。如在不同实施方式中，可按如下比例添加有机溶剂，所述比卡鲁胺的质量与所述有机溶剂的体积的比例为1g﹕1ml、1g﹕2ml、1g﹕3ml、1﹕4ml、1﹕5ml、1﹕6ml、1﹕7ml、1﹕8ml、1﹕9ml、1﹕10ml、1﹕11ml、1﹕12ml、1﹕13ml、1﹕14ml、1﹕15ml、1﹕16ml、1﹕17ml、1﹕18ml、1﹕19ml、1﹕20ml、1﹕21ml、1﹕22ml、1﹕23ml、1﹕24ml、1﹕25ml、1﹕26ml、1﹕27ml、1﹕28ml、1﹕29ml、1﹕30ml。可选的，所述比卡鲁胺与所述有机溶剂的比例为1g﹕(10-25)ml，进一步的可以为1g﹕20ml。在本发明一具体实施方式中，所述氧化剂选自双氧水和次氯酸钠中的至少一种。可选的，所述氧化剂与比卡鲁胺的摩尔比为1﹕(1～50)。如在不同实施方式中，所述氧化剂与比卡鲁胺的摩尔比可以为1﹕1、1﹕2、1﹕3、1﹕4、1﹕5、1﹕6、1﹕7、1﹕8、1﹕9、1﹕10、1﹕11、1﹕12、1﹕13、1﹕14、1﹕15、1﹕16、1﹕17、1﹕18、1﹕19、1﹕20、1﹕21、1﹕22、1﹕23、1﹕24、1﹕25、1﹕26、1﹕27、1﹕28、1﹕29、1﹕30、1﹕31、1﹕32、1﹕33、1﹕34、1﹕35、1﹕36、1﹕37、1﹕38、1﹕39、1﹕40、1﹕41、1﹕42、1﹕43、1﹕44、1﹕45、1﹕46、1﹕47、1﹕48、1﹕49、1﹕50等等。可选的，所述氧化剂与比卡鲁胺的摩尔比为1﹕(2～20)，进一步的可以为1﹕(5～15)，更进一步的可以为1﹕10。可选的，所述混合反应的反应温度可以为20～40℃。为了调控反应速度等，也可适当提高或降低反应温度。进一步的，所述混合反应的反应温度可以为室温25℃。可选的，所述混合反应的反应时间为1～8h，进一步的为3～5h。反应时间可根据实际反应情况进行调整，反应时间在上述范围内能够兼顾增加产物收率及纯度。在本发明一具体实施方式中，可在低温条件下加入氧化剂，避免反应过剧烈造成副反应等。如可在0～20℃条件下加入氧化剂，然后再于室温条件下搅拌反应。具体的，可以在冰浴条件下加入氧化剂，待氧化剂加入完毕后，升温至反应温度进行混合反应。可选的，所述方法还包括后处理步骤，所述后处理步骤包括：于水体系中搅拌析晶，分离得到比卡鲁胺杂质化合物粗品。在本发明一具体实施方式中，通过过滤的方式进行分离。可选的，所述于水体系中搅拌析晶包括：向混合反应完毕的体系中加水搅拌析晶，或者将混合反应完毕的体系加入至水中搅拌析晶。可选的，所述水的加入量为所述比卡鲁胺的质量的2～60倍。如在不同实施方式中，所述水的加入量可以为所述比卡鲁胺的质量的2倍、5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍等等。可选的，所述水的加入量为所述比卡鲁胺的质量的25～55倍，进一步的可以为30～50倍，更进一步的可以为40倍。水的加入量在上述范围内能够进一步保证产物的析出量同时兼顾析出晶体的纯度。可选的，所述搅拌的时间为1～3h；进一步的，所述搅拌的时间可以为2h。可选的，将所述比卡鲁胺杂质化合物粗品进行重结晶。可选的，所述重结晶采用的溶剂包括乙酸乙酯和正庚烷。可选的，所述乙酸乙酯和正庚烷的体积比为1﹕(3～10)，进一步的可以为1﹕3。本发明还提供了一种上述比卡鲁胺杂质化合物的检测方法，包括如下步骤：供试品溶液在高效液相色谱仪上进行检测，检测波长为250～260nm。可选的，所述检测波长为252～256nm，进一步可以为254nm。当前最新的欧洲药典(9.0版)、英国药典(版)和美国药典(40版)提供的有关物质检测方法使用了检测波长210nm或270nm，在该波长检测条件下，该比卡鲁胺杂质化合物的响应低，需要加大进样量，但是又会导致异构体杂质(如下式iii)与主峰的分离度达不到要求。因此，原欧洲药典(9.0版)、英国药典(版)和美国药典(40版)提供的有关物质检测方法不适用于该杂质的检测。例如，在美国药典标准检测方法下，检测波长为270nm，该比卡鲁胺杂质化合物的校正因子是2.8，响应值低，有超限风险(原标准按限度浓度0.1％控制)，在原药典检测方法下极容易被忽略。本发明在250～260nm比如254nm的检测波长下，能够极大的提高对该比卡鲁胺杂质化合物的检测灵敏度，该比卡鲁胺杂质的校正因子可达到0.71，改善该比卡鲁胺杂质化合物的响应性，可以对该杂质化合物进行准确定量。同时，该检测方法中比卡鲁胺杂质化合物的校正因子为0.71，可以选用不加校正因子的主成分外标法进行检测计算，和比卡鲁胺其他杂质的检测使用同一份对照品及供试品，避免了配制过程的繁琐。在本发明一具体实施方式中，将同体积的供试品溶液和比卡鲁胺对照品溶液分别在高效液相色谱仪上进行检测后，采用外标法对供试品溶液中的比卡鲁胺杂质化合物进行计算；所述外标法的计算公式如下：其中，杂质j：供试品溶液中所述比卡鲁胺杂质化合物的含量，单位％；c对：对照品浓度，单位mg/ml；c样：供试品浓度，单位mg/ml；a对：比卡鲁胺对照品溶液主峰面积；a杂质j：供试品溶液杂质j的峰面积。其中，对照品含量为对照品购买时自带标注的含量值，即对照品的纯度。可选的，高效液相色谱仪上进行检测的条件还包括：流动相a为体积分数为0.01％三氟乙酸的水溶液，流动相b为体积分数为0.01％三氟乙酸的乙腈溶液；进行梯度洗脱，时间/流动相a在流动相中所占体积分数分别为0min/66％～67％、16.5min/66％～67％、26.5min/39～40％、32.5min/4～5％、32.6min/66％～67％、35min/66％～67％。可选的，流动相的流速为0.8～1.2ml/min；进一步的，流动相的流速可以为1ml/mnin。可选的，供试品溶液的浓度为0.8～1.2mg/ml；进一步的，供试品溶液的浓度可以为1mg/ml。可选的，对照品溶液的浓度为0.8～1.2μg/ml；进一步的，对照品溶液的浓度可以为1μg/ml。本发明还提供了一种上述比卡鲁胺杂质化合物作为标准品或对照品在比卡鲁胺和/或其制剂的质量控制中的应用。与现有技术相比，本发明的有益效果为：(1)本发明提供了比卡鲁胺杂质化合物，该杂质化合物能够作为比卡鲁胺质量研究中的杂质对照品使用；(2)本发明提供了比卡鲁胺杂质化合物的制备方法，该制备方法操作简单，条件温和，制得的杂质化合物纯度高；(3)本发明的比卡鲁胺杂质化合物可以作为标准品或对照品，用于比卡鲁胺和/或其制剂的质量控制中，以提高比卡鲁胺临床用药等的安全性；(4)本发明还提供了该比卡鲁胺杂质化合物的检测方法，改善该比卡鲁胺杂质化合物的响应性，可以对该杂质化合物进行准确定量。附图说明为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本发明实施例提供的比卡鲁胺杂质化合物的质谱图；图2为本发明实施例提供的比卡鲁胺杂质化合物的核磁氢谱图；图3为本发明实施例提供的比卡鲁胺杂质化合物的紫外吸收图谱；图4为本发明实施例提供比卡鲁胺杂质化合物的高效液相色谱纯度图。具体实施方式下面将结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。本发明具体实施方式中，采用waters-sqd2质谱仪对化合物的结构进行表征。本发明具体实施方式中，采用400m高分辨超导核磁共振谱仪对化合物的结构进行表征。本发明中具体实施方式，采用waterse2695高效液相色谱仪对化合物的纯度进行确认。实施例1比卡鲁胺杂质化合物的制备方法，包括如下步骤：取比卡鲁胺(5.00g)加入至n,n-二甲基甲酰胺(100ml)中，搅拌溶解，加入碳酸钠(6.16g)，然后在冰浴条件下滴加30wt％双氧水(13.20g)。滴毕，改为室温条件下搅拌反应3h。反应完毕后，向反应完毕的体系中滴加水(200ml)，滴毕，于室温条件下搅拌2h，过滤得到类白色固体，即为比卡鲁胺杂质化合物粗品。使用乙酸乙酯和正庚烷(体积比为1﹕3)对得到的比卡鲁胺杂质化合物粗品进行重结晶，得到白色粉末4.74g。反应路线如下：实施例2比卡鲁胺杂质化合物的制备方法，包括如下步骤：取比卡鲁胺(5.00g)加入至丙酮(50ml)中，搅拌溶解，加入碳酸钠(6.16g)，然后分批次加入次氯酸钠(8.60g)。次氯酸钠加入完毕后，继续在室温条件下搅拌反应5h。反应完毕后，向反应完毕的体系中滴加水(100ml)。滴毕，于室温条件下搅拌2h，过滤得到比卡鲁胺杂质化合物粗品。使用乙酸乙酯和正庚烷(体积比为1﹕3)对得到的比卡鲁胺杂质化合物粗品重结晶，得到白色粉末，4.42g。实施例3比卡鲁胺杂质化合物的制备方法，包括如下步骤：取比卡鲁胺(5.00g)加入至二甲基亚砜(100ml)中，搅拌溶解，加入碳酸钠(6.16g)，然后在冰浴条件下滴加30wt％双氧水(13.20g)。滴毕，改为室温条件下搅拌反应3h。反应完毕后，向反应完毕的体系中滴加水(200ml)。滴毕，于室温条件下搅拌2h，过滤得到类白色固体，即为比卡鲁胺杂质化合物粗品。使用乙酸乙酯和正庚烷(体积比为1﹕3)对得到的比卡鲁胺杂质化合物粗品进行重结晶，得到白色粉末4.70g。实施例4比卡鲁胺杂质化合物的制备方法，包括如下步骤：取比卡鲁胺(5.00g)加入至二甲基亚砜(100ml)中，搅拌溶解，加入碳酸氢钠(4.88g)，然后在冰浴条件下滴加30wt％双氧水(13.20g)。滴毕，改为室温条件下搅拌反应3h。反应完毕后，向反应完毕的体系中滴加水(200ml)。滴毕，于室温条件下搅拌2h，过滤得到类白色固体，即为比卡鲁胺杂质化合物粗品。使用乙酸乙酯和正庚烷(体积比为1﹕3)对得到的比卡鲁胺杂质化合物粗品进行重结晶，得到白色粉末4.61g。实施例5本实施例提供了对比卡鲁胺中的比卡鲁胺杂质化合物的检测方法，包括如下步骤：仪器与试药：高效液相色谱仪；比卡鲁胺原料药供试品、比卡鲁胺对照品(纯度99.9％)；水为超纯水，其余试剂为色谱纯；供试品溶液浓度为1mg/ml，对照品溶液浓度为1μg/ml；其中，供试品溶液的制备方法：取卡鲁胺原料药供试品适量，精密称定，加乙腈-水(v/v＝1﹕1)溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；对照品溶液的制备方法：取比卡鲁胺对照品适量，精密称定，加乙腈-水(v/v＝1﹕1)溶解并定量稀释制成每1ml中约含1μg的溶液，作为对照品溶液；色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(c18，4.0×100mm，3μm或效能相当)；流动相a为体积分数为0.01％的三氟乙酸的水溶液，流动相b为体积分数为0.01％的三氟乙酸的乙腈溶液，梯度洗脱(0min、67％a，16.5min、67％a，26.5min、40％a，32.5min、5％a，32.6min、67％a，35min、67％a)，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，检测波长254nm，进样10μl；稀释剂为体积比为1﹕1的水和乙腈；具体测试方法：精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，以254nm为检测波长，记录色谱图；供试品溶液色谱图中如有杂质峰，按外标法以对照品溶液中比卡鲁胺峰面积计算；根据外标法计算公式计算供试品中杂质的含量：计算公式如下：其中，杂质j：供试品溶液中该比卡鲁胺杂质化合物j的含量；c对：对照品浓度(mg/ml)；c样：供试品浓度(mg/ml)；a对：比卡鲁胺对照品溶液主峰面积；a杂质j：供试品溶液杂质j的峰面积；对照品含量为99.9％。实施例6本实施例提供了比卡鲁胺杂质化合物的校正因子的计算，具体包括如下：(1)溶液配制空白溶剂：体积比为50﹕50的乙腈和水线性贮备液(100μg/ml)：取比卡鲁胺对照品、比卡鲁胺杂质化合物对照品各10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加适量溶剂超声使溶解，放至室温，用溶剂稀释至刻度，摇匀。200％杂质限度浓度线性溶液：精密量取线性贮备液5ml，置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。100％杂质限度浓度线性溶液：精密量取200％杂质限度浓度线性溶液5ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。80％杂质限度浓度线性溶液：精密量取200％杂质限度浓度线性溶液4ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。40％杂质限度浓度线性溶液：精密量取200％杂质限度浓度线性溶液2ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。定量限溶液：s/n≥10。(2)测试测试条件：精密量取各浓度线性溶液10μl，分别注入液相色谱仪，以254nm为检测波长，记录色谱图；色谱条件参考实施例5；测试结果见表1-2；表1比卡鲁胺杂质化合物的线性测试结果(254nm)表2比卡鲁胺的线性测试结果(254nm)根据上述结果计算校正因子，校正因子＝主成分的斜率/杂质的斜率，结果如表3所示：表3校正因子计算结果名称校正因子比卡鲁胺杂质化合物0.71比卡鲁胺/实验例1比卡鲁胺杂质化合物的结构表征以实施例1为例，采用质谱、核磁共振氢谱对实施例1中制备得到的比卡鲁胺杂质化合物的结构进行确认。质谱表征结果：图1为比卡鲁胺杂质化合物的质谱图，从图中可知，ms(lc-ms)＝447(m-h-)，与理论值一致。核磁共振氢谱表征结果：图2为比卡鲁胺杂质化合物的核磁共振氢谱，具体数据如下：1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ：10.001(s，1h)，8.169-8.172(d，1h)，7.840-7.971(m，3h)，7.471-7.492(d，2h)，7.373-7.417(m，2h)，6.247(s，1h)，3.676-3.941(d，2h)，1.400(s，3h)。紫外吸收图谱：图3为比卡鲁胺杂质化合物的紫外吸收图谱，从图中可以看出，比卡鲁胺杂质化合物的最大吸收波长为254.0nm；由此可知，在250～260nm波长下，能够有效检测出比卡鲁胺杂质化合物。比卡鲁胺杂质化合物的纯度测试以实施例1为例，通过hplc检测纯度，图4为比卡鲁胺杂质化合物的高效液相色谱纯度图，纯度为99.35％。其中，纯度测试的方法中：检测波长为254nm，其他检测条件参考美国药典(40版)提供的比卡鲁胺有关物质检测方法。最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。当前第1页1 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技术特征：

1.比卡鲁胺杂质化合物，其特征在于，其结构式如式(i)所示：

2.权利要求1所述的比卡鲁胺杂质化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

在碱的作用下，比卡鲁胺与氧化剂混合反应。

3.根据权利要求2所述的比卡鲁胺杂质化合物的制备方法，其特征在于，所述碱选自无机碱；

优选的，所述无机碱包括碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾和磷酸钾中的至少一种；

优选的，所述无机碱与比卡鲁胺的摩尔比为1﹕(1～10)。

4.根据权利要求2所述的比卡鲁胺杂质化合物的制备方法，其特征在于，所述混合反应的体系中还包括有机溶剂；

优选的，所述有机溶剂包括非质子有机溶剂；

更优选的，所述非质子有机溶剂选自二甲基亚砜、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺和丙酮中的至少一种；

优选的，所述比卡鲁胺与所述有机溶剂的比例为1g﹕(1～30)ml。

5.根据权利要求2-4任一项所述的比卡鲁胺杂质化合物的制备方法，其特征在于，所述氧化剂选自双氧水和次氯酸钠中的至少一种；