滨州市中心医院检验科GeneXpert产毒艰难梭菌（C.difficile）检测项目推介
项目介绍：
名称：艰难梭菌毒素基因检测（Xpert® C. difficile）
待检人群：1.以医院获得性腹泻为主
2.急性腹泻，或者慢性腹泻急性加重 ，1天内≥3次腹泻；不成型大便（5级～7级）
3.结肠切除术者排泄量≥1300ml
4.伪膜性肠炎
5.临床怀疑艰难梭菌感染（CDI）可能
6.近期接受过抗生素治疗或化疗（8周内），老年人，接受腹腔手术等
7.检测无腹泻者粪便中的艰难梭菌或毒素没有临床意义。
8. CDI患者接受治疗期间或治疗后检测粪便亦无临床价值。
9.除非怀疑肠梗阻由艰难梭菌所致时可采用肛拭子（同时需要毒素检测）
收费标准：600元/人次
标本要求：流动性粪便
临床推广：
艰难梭菌（C-diff，CD）作为医院和社区感染性腹泻，尤其是伪膜性肠炎等相关疾病的重要病原体，近年来在欧美等发达国家及地区日益受到关注，但在中国，医学领域对艰难梭菌感染（CDI）的认识较为缺乏。
艰难梭菌（C-diff，CD）是一种革兰氏阳性、可产毒素的专性厌氧芽孢杆菌，是引起院内肠道感染的主要致病菌之一。临床上，约15%-25%的抗菌药物相关性腹泻（antibiotic associated diarrhea， AAD）、50%-70%的抗菌药物相关性肠炎和95%-100%的伪膜性肠炎（pseudomembranous colitis，PMC）是有艰难梭菌感染（CDI）引起。CDI主要有铲毒CD过度繁殖导致肠道菌群失调并释放毒素所引起，主要临床症状为发热，腹痛，水样便腹泻。CDI通常由长期或不规范使用抗菌药物引起，轻者引起腹泻，严重者引发伪膜性肠炎，且常伴有中毒性巨结肠、肠穿孔、感染性休克等并发症，甚至最终导致死亡。其高产毒菌株PCR-核糖体分型027型/脉冲场凝胶电泳分型NAP1型/限制性内切酶分型BI型（027/NAP1/BI）在欧洲和北美地区的爆发流行，引起高达50%的死亡率。在我国，腹泻阳性患者的艰难梭菌检出率为15-40%，并已有027型高产毒株感染的报道。艰难梭菌感染（CDI）发病率上升惊人，严重性日趋恶化，常导致住院时间延长、医疗花费激增、发病率及病死率增高。
目前，艰难梭菌感染的诊断方法中，培养需厌氧环境而对实验室设备要求较高， GDH检测灵敏度较高但无法区分产毒艰难梭菌，毒素检测灵敏度低而易造成漏诊，GDH + 毒素A/B检测或核酸扩增检测的组合需要批量处理样本而导致诊断延迟，因而都不宜作为艰难梭菌感染检测的单独检测方法。而核酸扩增检测有着优秀的灵敏度和特异性，被各类相关指南推荐可作为唯一的独立测试技术检测产毒素艰难梭菌。
Xpert® C. difficile是一款基于半巢式实时荧光定量PCR原理，可在反应盒内全封闭、全自动完成样本处理及核酸扩增检测的分子诊断产品，且是唯一一款可预测高产毒株027/NAP1/B1型的商业化产品。我院开展此项检测项目可弥补目前产毒艰难梭菌检测的一个空白，且做到与国际最先进水平接轨，具有十分重要的意义。
临床意义：
（1）最大程度发现产毒艰难梭菌携带患者：与现有两步法（GDH+毒素A/B检测）相比，Xpert® C. difficile具有更高的灵敏度，可发现更多艰难梭菌感染或定植患者，为临床医生提供准确的诊疗和感染防控措施依据。同时高灵敏度的检测也避免了重复检测和附件试验，从而降低检测成本；
（2）快速提供检测结果：Xpert® C. difficile 可在45分钟内给出3个与产毒相关的基因检测结果，进而帮助临床医生快速做出临床决策，改善患者预后；
（3）提升院内感染控制水平：艰难梭菌属于院内传播的感染性疾病病原菌，及时、快速的诊断无疑有助于控制其在社区及院内的传播；
（4）可预测高产毒菌株027/NAP1/BI型：可检测毒素B相关基因tcdB、抑制子基因tcdC以及二元毒素基因cdtA, tcdC、cdtA与高产毒菌株相关，因而可预测高毒力菌株027/NAP1/BI型的存在，此发现直接影响到后续的治疗方案。
Xpert® C. difficile可在45分钟内检测出产毒艰难梭菌，临床医生可快速做出治疗决策，改善患者预后；及时实施感控措施，避免进一步传播；高敏感性的检测避免了重复检测和附加试验；实现更加的患者管理。
实验室检测：
艰难梭菌（C-diff）是一种革兰氏阳性、可产毒素的专性厌氧芽孢杆菌。于1978年被首次证实与疾病有关，可通过粪-口途径传播给人类。在欧美国家，艰难梭菌感染（CDI）发病率上升惊人，是导致住院患者感染性腹泻的主要病原体，使病人住院时间延长、医疗花费激增，甚至死亡。其高产毒菌株PCR-核糖体分型027型/脉冲场凝胶电泳分型NAP1型/限制性内切酶分型BI型（027/NAP1/BI）在欧洲和北美地区的爆发流行，引起高达50%的死亡率。在我国，腹泻阳性患者的艰难梭菌检出率为15-40%，并已有027型高产毒株感染的报道。
目前，艰难梭菌感染的诊断方法中，培养需厌氧环境而对实验室设备要求较高， GDH检测灵敏度较高但无法区分产毒艰难梭菌，毒素检测灵敏度低而易造成漏诊，GDH+毒素A/B检测或核酸扩增检测的组合需要批量处理样本而导致诊断延迟，因而都不宜作为艰难梭菌感染检测的单独检测方法。而核酸扩增检测有着优秀的灵敏度和特异性，被各类相关指南推荐可作为唯一的独立测试技术检测产毒素艰难梭菌。
Xpert® C. difficile是一款基于半巢式实时荧光定量PCR原理，可在反应盒内全封闭、全自动完成样本处理及核酸扩增检测的分子诊断产品，且是唯一一款可预测高产毒株027/NAP1/B1型的商业化产品。我院开展此项检测项目可弥补目前产毒艰难梭菌检测的一个空白，且做到与国际最先进水平接轨，具有十分重要的意义。
目前，常使用不成形粪便样本进行艰难梭菌感染诊断，方法包括：培养、谷氨酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase, GDH）检测、酶联免疫检测（毒素）、多种方法组合检测，及核酸扩增检测：
（1）培养常采用CCFA培养基（Cefoxitin-cycloserine-Fructose Agar）进行厌氧培养，需48~72 h，厌氧环境要求高，且无法区分产毒菌株；
（2）GDH检测利用酶免疫方法（Enzyme immunoassays, EIAs）检测GHD而间接检测艰难梭菌，灵敏度相对较高，但因无法区分产毒艰难梭菌，而不能单独使用；
（3）酶联免疫检测（毒素） 利用EIAs技术直接检测艰难梭菌产生的毒素，鉴于其诊断迅速和实施便捷的优点，过去常作为检测艰难梭菌感染的主要方法，但其灵敏度有限，不能单独使用，需联合高灵敏的GDH检测或核酸扩增技术使用；
（4）多种方法组合检测 常使用GDH + 毒素A/B检测或核酸扩增检测的组合，虽然可保证灵敏度，但需要批量处理样本，导致诊断延迟，不能为临床决策及时提供所需信息；
（5）核酸扩增检测（Nucleic acid amplification tests, NAATs）利用PCR等方法检测艰难梭菌的产毒基因，其灵敏度和特异性均较酶联免疫类方法高，而被各类艰难梭菌临床指南推荐其可作为唯一的独立测试技术检测产毒素艰难梭菌。
Xpert® C. difficile基于半巢式实时荧光定量PCR技术，设计有3条探针分别特异性检测毒素B基因（tcdB）、二元毒素基因（cdtA）和抑制子基因（tcdC）缺失，进而用于诊断是否为艰难梭菌，并预测是否为高产毒流行菌株027/NAP1/BI型。Xpert® C. difficile试剂盒需在GeneXpert® Dx System平台上运行。该系统使用封闭反应盒，反应盒内预装核酸纯化和巢式PCR扩增试剂，利用流体和微流体技术，在反应盒内全自动完成样品处理、核酸提取、荧光定量PCR检测等全过程。
高敏感性、高特异性：通过实时定量核酸扩增方法检测艰难梭菌毒素相关基因，其诊断产毒艰难梭菌携带者的敏感性和特异度分别为94%和99%，预测027/NAP1/BI型高产毒流行菌株的灵敏度与特异性分别达到100%和98%；
随时检测、报告快速：即送即检，单标本上机检测可45分钟报告结果，真正实现了检测当日即可提供临床直接完整的诊断依据；
可预测高产毒流行菌株027/NAP1/BI型：可检测毒素B相关基因tcdB、抑制子基因tcdC以及二元毒素基因cdtA, tcdC、cdtA与高产毒菌株相关，因而可预测高毒力流行株027/NAP1/BI型的存在；
操作简单、安全性好：流程简单，全程手工操作时间仅1分钟，上机后全程封闭检测，无污染风险；
高度集成化，从样本到结果：基于GeneXpert® Dx System平台，全自动完成“提纯、扩增、检测至报告”所有分子诊断环节，尽量减少人为误差和污染的可能性、降低生物安全性的要求、操作人员的培训要求，可应用在非传统意义的实验室中；
内置质控，高准确度：反应盒内预装样本处理质控（SPC）和探针质控（PCC），与样本同时运行整个检测过程，即不需要消耗额外的试剂，也真正实现对每个样本检测过程的监控，确保检测的高准确度；
室温储存试剂：试剂可室温储存（2~28℃），基于创新的干燥酶反应珠技术，Xpert® C. difficile试剂盒可室温储存长达2年。
高通量：配合GeneXpert16-8仪器，单次可同时检测8例标本，每日8小时工作时间内可检测多达64例标本。
操作步骤简单3步法：
1、把拭子短暂插入未成形粪便样本中（拭子无需完全浸透），再放入装有样本处理液的小瓶中；
2、震荡混匀后将全部样本处理液移至Xpert® C.difficile 反应盒的“S”腔室中；
3、将反应盒置入仪器，上机检测 。
基于GeneXpert® Dx System全自动化平台的检测，集样本提取、核酸扩增至PCR检测等流程于封闭的系统中完成，且不存在仪器与试剂盒的任何湿式接触。根据我国卫生部关于基因扩增检验实验室的相关要求，基于仪器的功能，标本制备区、扩增区、扩增产物分析区等区域可适当合并。因此，使用GeneXpert® Dx System平台开展Xpert® C. difficile检测项目，只需要一单独的房间即可满足原来需要3个房间的PCR实验室要求。
■中心医院·用心领航
■院宣传科编辑发布
■投稿邮箱：bzszxyy@
Hello，小伙伴们长按二维码关注我们吧！
如果觉得《【填补全市空白】滨州市中心医院检验科又新增检测项目了！》对你有帮助，请点赞、收藏，并留下你的观点哦！
