本文主要是关于应用高效液相色谱法（HPLC）测定肾康宁胶囊中丹酚酸B的含量——其中色谱条件为：Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）色谱柱，以乙腈﹣1%磷酸溶液（22:78）为流动相；柱温为20℃；流速为每分钟1.2 mL；检测波长286 nm。结果显示，丹酚酸B在进样量为401.6～1 606.4 ng范围内呈良好的线性关系，回归方程式为y=221.97x+81.31，r2=0.9994，平均加样回收率99.8%，RSD为1.4%。因此可得出结论：新建立的丹酚酸B高效液相色谱方法，用于肾康宁胶囊中丹酚酸B含量的测定，操作简便，结果可靠，重复性好，更具有质量把控性。
肾康宁胶囊是由黄芪、丹参、茯苓、泽泻、益母草、淡附片、锁阳、山药八味中药及淀粉等辅料制成的胶囊剂。具有补脾温肾，渗湿活血之功效[1-2]，临床用于脾肾阳虚、血瘀湿阻所致的水肿，症见浮肿、乏力、腰膝冷痛；慢性肾炎见上述证候者。迄今有关肾康宁胶囊成分定量研究的报道较少，并且集中在高效液相法测定丹参素含量和蒸发光散射法测定黄芪甲苷含量的研究，尚未见其他成分定量研究。丹参为方中臣药，其含有丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参素、丹酚酸B、原儿茶醛等活性成分[3]。中国药典中丹参测定丹参素及丹酸酸B[4]。肾康宁胶囊标准中通过检测丹参素来对丹参进行质量评价，而丹酚酸B也是其中的主要的活性成分之一，增加丹酚酸B的含量测定更有利于反映肾康宁胶囊质量，研究丹酚酸B的定量分析方法并控制其含量对肾康宁胶囊的质量评价具有重要的意义。为了更有效、更全面地控制产品质量，本研究在原质量标准的基础上，增加了丹参中丹酚酸B的HPLC含量测定方法。
1 仪器与试药
1.1仪器设备
美国Agilent 1260型高效液相色谱仪（含G1311C四元泵、G1329B自动进样器、G1314F检测器、Chem32工作站）；BSA224S-CW电子分析天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；9960D型超声波清洗仪（CBL科贝尔）。
1.2试剂与试药
乙腈（色谱纯；来源：西陇科学股份有限公司）、甲醇（分析纯；来源：天津市恒兴化学试剂有限公司）、磷酸（分析纯；来源：天津市风船化学试剂有限公司）、丹酚酸B对照品（批号：110766-18；来源：中国药品生物制品检定所）；水均来自自制超纯水。3批肾康宁胶囊（批号：180703、180801、180802，规格：每粒装0.35 g）由江西普正制药有限公司生产和提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：乙腈﹣1%磷酸溶液（22:78）为流动相；柱温为20℃；流速为每分钟1.2 mL；检测波长286 nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于4 000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取丹酚酸B对照品适量，加80%甲醇制成每1 ml含0.10 mg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取内容物约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇溶液50 mL，称定重量，超声处理（功率140 W，频率42 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45 µm）滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照溶液与供试品溶液各10 ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.4提取溶剂的选择
取肾康宁胶囊样品（批号分别为180703、180801、180802），分别用50%甲醇、80%甲醇提取溶剂，按“供试品溶液的制备”项下方法制备供试液，连续进行3批次测定，测定结果见下图1、表1。
图1 取肾康宁胶囊样品（批号分别为180703、180801、180802），分别用50%甲醇、80%甲醇提取溶剂，按“供试品溶液的制备”项下方法制备供试液，连续进行3批次测定
2.5提取时间的选择：
取肾康宁胶囊样品（批号分别为180703、180801、180802），分别采用超声20 min、30 min、45 min的方式，按“供试品溶液的制备”项下方法制备供试液，测定并记录色谱图，结果见表2。
2.6色谱柱比较
精密吸取同一对照品溶液，分别采用不同品牌的色谱柱安捷伦色谱柱（Eclipse XDB-C18 4.6×250 mm 5 µm）；依利特色谱柱（XDB-C18 4.6×250 mm 5 µm）按“色谱条件与系统适用性试验”项下色谱方法测定并记录色谱图，其RSD%分别为0.4%、1.2%。结果见表3。
2.7线性关系的考察
精密量取丹酚酸B对照品溶液（浓度为1.004 mg/mL）0.4，0.8，1，1.2，1.6 mL，置10 mL容量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度。精密吸取对照溶液10 uL，注入液相色谱仪，测定，即得对照品峰面积，以对照品浓度和峰面积进行回归方程处理，回归方程式为y=221.97x+81.31，r2=0.9994，并以峰面积对浓度作图，得一直线，结果表明肾康宁胶囊中丹酚酸B对照品在此浓度范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。结果分别见下图2及见表4。
2.8重复性试验
精密吸取对照品溶液按“色谱条件与系统适用性试验”项下方法试验，每次进样量为10 µL，重复进样6次，丹酚酸B色谱峰面积的RSD值为0.4%。结果见表5。
2.9精密度试验
取肾康宁胶囊样品批号为180703，按“供试品溶液的制备”项下方法制备样品溶液，按“色谱条件与系统适用性试验”项下色谱条件由不同的人员在不同的时间进行测定，结果见表6。
2.10回收试验
取肾康宁胶囊样品（批号：181204，含量1.43 mg/粒）20粒的内容物，研细，混合均匀，取约0.5 g，共6份，分别精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入丹酚酸B对照品溶液（0.2 011 mg/mL）10 mL，按“供试品溶液的制备”项下方法制备，按“色谱条件与系统适用性试验”项下试验，结果见表7。
2.11样品的测定
取5批肾康宁胶囊样品（批号分别为：181201、181202、181203、181204、181205）内容物，按“供试品溶液的制备”项下方法制备供应品溶液，“色谱条件与系统适用性试验”项下色谱条件进行测定，结果见表8。
3结论
肾康宁胶囊为江西普正制药有限公司生产品种，已上市销售多年。检测指标原标准中没有丹酚酸B含量检测。波长选择：《中华人民共和国药典》 版一部中丹参药材项下“丹酚酸B”的检测波长为286 nm,故参考286 nm波长作为肾康宁胶囊“丹酚酸B”的检测波长。本次实验建立了丹酚酸B含量测定方法并对提取的溶液、提取的时间进行了考察，根据实验结果确定了最佳提取溶剂为80%甲醇和最佳提取时间为超声30 min。同时对色谱柱也进行比较，优选确定适宜色谱柱为安捷伦色谱柱（Eclipse XDB-C18 4.6×250 mm 5 µm）。通过方法学考察，本实验采用 “用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：乙腈﹣1%磷酸溶液（22:78）为流动相；柱温为20℃；流速为每分钟1.2 mL；检测波长286 nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于4 000” 的方法其线性关系良好、加样回收率良好、精密度及重复性良好，新的方法操作简便，结果可靠，更具有质量把控性。
【参考文献】
[1] 李才堂,杜剑松,虞金宝.肾康宁胶囊的质量标准研究[J].中国新药杂志,,17(5):402-404.
[2] 张大军，王兆华.高效液相色谱法测定肾康宁胶囊中丹参素的含量.中国中医药信息杂质，,10(15).
[3] 王静，董振华，芦波，符德玉.丹参活性成分及制剂在心血管病中的研究进展.时珍国医国药第30卷第6期.
[4] 《中华人民共和国药典》 版一部.
文/夏淑英、贾天亮、康爱华、旷春兰、肖绍川、张小梅
本文作者夏淑英系江西普正制药股份有限公司助理工程师。本文审稿人系河南省食品药品审评查验中心乔晓芳女士。
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