1.14
NK细胞刺激cDC1募集到肿瘤微环境中促进癌症免疫调节
NK Cells Stimulate Recruitment of cDC1 into the Tumor Microenvironment Promoting Cancer Immune Control
Cell (IF= 31.398)
01
背景介绍
1.肿瘤微环境（tumor microenvironment）：一个成型的肿瘤是一个复杂的组织，它不仅由肿瘤细胞组成，还包括也基质细胞，炎症细胞，脉管系统和细胞外基质（ECM），所有这些总和定义为肿瘤微环境。
2.为什么要研究树突状细胞？
T和B淋巴细胞是适应性免疫系统的基本效应细胞，但APC（抗原递呈细胞）作为其上游，起着守门员的角色，几乎可以启动和塑造任何适应性免疫反应。树突状细胞（DC）就是APC中递呈抗原能力ZUI强的一种。
越来越多的证据表明，DC对于致耐受性或促炎性局部免疫环境是至关重要的，因此，在自身免疫性疾病以及癌症等疾病中，将DC的生物学机制研究清楚，就可能揭示治疗干预的新方法。
3.分析步骤详解
第一步，首先是常规的圈取液流稳定部分、选择单个核细胞区域、排除粘连体、圈选CD45+活细胞区域。
第二步，通过CD16/CD14，圈出CD14+单核细胞和CD14-细胞，接着将CD14-细胞显示在CD19/CD3图上，圈出CD3+T细胞、CD19+B细胞、CD3-CD19-细胞，在这里CD3+T可通过CD4/CD8分为CD4+T、CD8+T、DNT三个主要亚群;
对CD4+T和CD8+T两个亚群，可进一步通过CCR7和CD45RA圈出其中Naive功能状态的亚群；而CD19+B细胞则可继续分析其CD80+的比例。
第三步，对第二步中圈出的CD14-CD3-CD19-部分细胞，进一步用CD56/CD123散点图分析，圈出CD56+NK、CD123高表达的pDC、CD56-CD123low的DC候选群体，接着可根据CD11c/HLA-DR，圈出准确的双阳性DC群体，最后根据CD141/CD1c分析DC（不包括pDC）中的三个亚群：CD141+DC、CD1c+DC、DN DC。
第四步，分析pDC、CD141+DC、CD1c+DC、DN DC四个亚群中CD26、BTLA、CD32、CD38、CX3CR1、CD85k、CD11b、sirpa、CD40、CD86、CD45RA的表达水平。
最后一步，利用FMO作为设门对照，分析总DC中CX3CR1、CD85k、CD40、CD163、CD86的表达水平。
以下是该方案分析的亚群：
B细胞（CD45.2＋CD19＋），T细胞（CD45.2＋TCRβ＋），NK细胞（CD45.2＋TCRβ－CD49b＋NKp46＋），髓系细胞（CD45.2＋CD11b＋）。
髓系细胞进一步分为：
树突状细胞（CD45.2＋CD11b＋CD11c＋MHCII＋，包括淋巴样DC和髓样DC）；
中性粒细胞（CD45.2＋CD11b＋Ly6G＋）；
巨噬细胞（CD45.2＋CD11b＋Ly6G－Ly6C low，包括AAM）；
单核细胞（CD45.2＋CD11b＋Ly6G－Ly6C high）；
4.常规DC（cDC）对抗肿瘤免疫的贡献主要体现在它们呈现肿瘤抗原和分泌调节T细胞存活和效应子功能的细胞因子的能力。
cDC可以分为至少两个子集，常规1型树突状细胞（cDC1）和常规2型树突状细胞（cDC2）。cDC1子集依赖于其转录因子Batf3的发育，并且可以通过选择性表达C型凝集素受体DNGR-1（又名CLEC9A）和趋化因子受体XCR1来鉴定，以及在非淋巴器官和肿瘤中在CD11b低表达的情况下整合素aE（CD103）的高表达。cDC1子集依赖于其转录因子Batf3的发育，并且可以通过在非淋巴器官和肿瘤中选择性表达C型凝集素受体DNGR-1（又名CLEC9A）和趋化因子受体XCR1来鉴定。在Batf3- /-小鼠中cDC1的缺乏消除了免疫原性肿瘤的排斥以及对过继性T细胞疗法和免疫检查点封锁的反应。
5.前列腺素E2（PGE2）是一种具有免疫调节功能的前列腺素，由多种细胞类型产生，并在细胞死亡后进一步释放。先前发现许多肿瘤分泌PGE2来抑制抗癌免疫力。在此类肿瘤中，由Ptgs1和Ptgs2基因编码的环氧合酶的遗传消融导致无法产生PGE2，并使癌症易感于依赖cDC1的CD8 + T细胞介导的免疫控制。因此，缺乏PGE2产生的小鼠肿瘤是一个理想的系统，可以剖析cDC1积累的潜在机制。
02
全文思路
03
实验结果
Fig1.cDC1在COX缺乏型肿瘤的肿瘤微环境中累积；
图1A：
图文描述：将2 x106个Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E细胞皮下注射至野生型（WT）小鼠体内。4天后通过流式细胞术分析了肿瘤浸润的免疫细胞。
结果分析：作者建立了流式细胞术染色方案，可以区分肿瘤中的cDC1和其他CD11c + II类MHC（MHCII）+骨髓细胞群，包括CD64 +巨噬细胞和CD11b + cDC2。
补充知识点：CD11c 是DC成熟的标志，MHCⅠ与MHCⅡ是DC表面呈递抗原的重要分子，MHCⅠ分子主要呈递细胞内产生的抗原，MHCⅡ分子主要呈递细胞外产生的抗原。CD40、CD80和CD86是DC表面的共刺激分子。
图1B：
图文描述：肿瘤内cDC1和CD103- CD11c + MHCII +细胞的cDC1标记分析。
树突状细胞自然杀伤细胞凝集素家族受体1(DC NK lectin group receptor-1,DNGR-1)；
趋化因子C-基元受体1(XCR1)重组蛋白；
干扰素调节因子8(Interferon regμlatory factor8, IRF8),又名干扰素同源序列结合蛋白。
图1C：
图文描述：将2 x106个对照细胞或Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E黑色素瘤细胞皮下接种至WT小鼠后4天，量化肿瘤块大小和肿瘤内免疫细胞。
结果分析：对照组和Ptgs1 / Ptgs2- /-BRAF-V600E肿瘤在CD45 +白细胞总数，CD11c + MHCII +细胞总数和肿瘤肿块方面大致相同。然而，Ptgs 1/Ptgs 2- /-BRAFV600E显示cDC1在比例和总数上明显增加。
图1D：
图文描述：对照组和Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤的代表性切片。箭头指示cDC1的多细胞簇。比例尺，50毫米。
结果分析：与流式细胞分析相一致的是，cDC1在对照组中的免疫荧光共焦图像中稀疏，而在ptgs 1/ptgs 2-/-BRAFV600E肿瘤中则非常丰富。
图1E，F：
图文描述：E是D图像的表面重建，显示了对照组和Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E黑色素瘤中cDC1和CD103 MHCII +细胞的定位。F是基于E的距离分析。数据代表来自6个肿瘤的8张图像的量化。
结果分析：共聚焦图像中cDC1轮廓的表面重建后，通过距离分析确认了cDC1s的肿瘤浸润，发现与对照肿瘤相比，Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E黑色素瘤中的cDC1距肿瘤边缘和CD31 +血管更远。
图1G，H：
图文描述：用2x105个对照细胞或Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E细胞接种WT或Batf3- /-小鼠，并随时间分析肿瘤生长。12天后，对T细胞进行定量（H）。
结果分析：COX缺乏对肿瘤有免疫控制的作用，在缺乏cDC1的Batf3-/-小鼠中失去了这种控制作用。这种失控与CD8 + T细胞的肿瘤浸润明显减少有关，与CD4+T细胞无关。
图1I：
图文描述：WT和Batf3- /-小鼠被带有2x106个对照或Ptgs1 / Ptgs2 / BRAFV600E细胞皮下注射。12天后对细胞内GzmB（颗粒酶B）进行染色。
结果分析：与野生型相比，Batf3- /-小鼠中的CD8+记忆T细胞（TRM）和CD8+CD103-的T细胞的颗粒酶B表达都降低，但在CD4+的T细胞中并无此发现。
Fig2.在COX缺乏的BRAFV600E黑色素瘤中cDC1的积累取决于NK细胞；
图2A：
图文描述：对对照或Ptgs1 / Ptgs2- /- BRAFV600E肿瘤中的肿瘤浸润淋巴细胞的定量（第4天）。
结果分析：除了cDC1的增加和T细胞群体峰值增加外，Ptgs1 / Ptgs2- /- BRAFV600E黑色素瘤还显示NK细胞和CD3+细胞的显着升高。
图2B：
图文描述：Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤的图像。对照组中此细胞表达很低。插图显示多细胞簇CD103 + cDC1和NK1.1 +细胞的共定位。比例尺，50毫米。虚线表示肿瘤边缘。
结果分析：肿瘤内NK细胞的分布与cDC1高度相似，这表现为两种细胞类型的多细胞簇位于彼此的5-10 mm之内。
图2C：
图文描述：基于（B）的距离分析。数据代表来自6个肿瘤的6张图像的量化。
结果分析：结果显示cDC1相对于其他MHCII细胞更接近NK细胞。
图2D：
图文描述：来自MMTV-PyMT小鼠的肿瘤图像。插图显示CD103 + cDC1和NK1.1 +细胞的共定位。比例尺，100毫米。
结果分析：同样，在自发的基因工程乳腺癌模型（MMTV-PyMT）中，在多细胞簇中发现cDC1和NK细胞，这表明共定位不是肿瘤细胞移植的结果。
图2E：
图文描述：基于（D）的距离分析。数据代表来自4个肿瘤的8张图像的量化。
结果分析：在自发的基因工程乳腺癌模型（MMTV-PyMT）中，cDC1相对于其他MHCII细胞更接近NK细胞。
图2F：
图文描述：在皮下注射后4天，对对照和Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤中cDC1的定量。将2x106个肿瘤细胞接种到WT小鼠，Rag1 -/-小鼠或Rag2 -/ -Il2rg -/-小鼠中。
补充知识：Rag1 -/-小鼠缺乏T细胞，B细胞，但有NK细胞；Rag2 -/ -Il2rg -/-小鼠缺乏T细胞，B细胞，NK细胞。
结果分析：在野生型（WT）和Rag1 -/-小鼠中观察到许多cDC1，但在移植到Rag2 -/- Il2rg- /-小鼠的肿瘤中cDC1未能积聚。说明T细胞和B细胞不影响cDC1的募集，而NK细胞会影响。F和G都说明了cDC1的募集是依赖于NK细胞的。
图2H：
图文描述：在接种WT小鼠或Batf3 -/-小鼠后4天，对对照或Ptgs1 / Ptgs2 -/ -BRAFV600E肿瘤中的NK细胞进行定量。
结果分析：与观察到的cDC1积累对肿瘤内NK细胞的依赖性相反，Batf3-/-小鼠的cDC1缺乏对Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤中的NK细胞数量没有影响。所以cDC1并不影响NK细胞的富集。
图2I：
图文描述：NK细胞耗竭对WT和Batf3- /-小鼠中Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤生长的影响。
结果分析：抗体介导的NK细胞耗竭导致WT小鼠Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤的快速生长。但是在Batf3- /-小鼠中无此现象。说明NK细胞是通过cDC1来抑制肿瘤生长的。cDC1可以影响NK细胞的功能。
Fig3.NK细胞是肿瘤中XCL1和CCL5的主要来源，并直接被PGE2抑制；
图3A：
图文描述：基于对来自脾脏免疫细胞的整体基因表达数据的分析，小鼠NK细胞对趋化因子的选择性表达（数据集GSE15907）。
结果分析：免疫基因组（ImmGen）项目的基因表达数据分析表明，NK细胞可以表达6种趋化因子CCL5，CCL3，XCL1，CXCL1，CCL4和CCL27A（可以借鉴）。
图3B：
图文描述：WT小鼠经皮下注射，用2x106个对照或Ptgs1 / Ptgs2- /- BRAFV600E细胞，并在4天后取出肿瘤。通过蛋白质阵列确定的肿瘤裂解物中的趋化因子表达。
结果分析：在蛋白质阵列中，Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E早期（第4天）肿瘤的裂解物显示的CCL5和CXCL10比COX充足的对照肿瘤裂解物高。
图3C：
图文描述：基于（B）的光密度分析的相对趋化因子表达（定量分析）。
结果分析：在蛋白质阵列中，Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E早期（第4天）肿瘤的裂解物显示的CCL5比COX充足的对照肿瘤裂解物高45倍，而CCL27A的裂解率则略有增加（<2倍）。NK细胞产生的其他趋化因子要么在对照组与Ptgs 1/Ptgs 2之间略有下降(CXCL 1)。或者蛋白阵列中的BRAFV600E肿瘤无法检测到裂解(CCL 3和CCl 4)。
图3D：
图文描述：植瘤4天后，测量总肿瘤提取物中的CCL5蛋白水平。
结果分析：Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤的裂解物中高水平的CCL5蛋白，但对照BRAFV600E肿瘤裂解物中却没有，这个结果通过细胞计数珠阵列（CBA）分析得到证实。
图3E：
图文描述：植瘤4天后，测量总肿瘤提取物中Xcl1 mRNA水平。
结果分析：因为Xcl1，即cDC1表达的趋化因子受体XCR1的配体，在蛋白质或细胞计数微珠阵列中不存在，所以分析了肿瘤提取物中的Xcl1 mRNA。与CCL5蛋白类似，Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E第4天肿瘤中含有大量XCL1转录本，而对照组没有。
图3F：
图文描述：植瘤4天后，免疫细胞内CCL5蛋白的流式细胞仪分析。
结果分析：通过细胞内流式细胞术发现，Ptgs1 / Ptgs2 -/ -BRAFV600E肿瘤中NK细胞而非MHCII +细胞的CCL5蛋白染色呈阳性，而非对照组肿瘤。在此时间点，罕见的浸润性CD8 + T细胞也产生了CCL5。
图3G：
图文描述：植瘤4天后，免疫细胞内Xcl1 mRNA的流式细胞仪分析。
结果分析：通过细胞内流式细胞术发现，与对照组相比，Ptgs1 / Ptgs2 -/ -BRAFV600E肿瘤中NK细胞而非MHCII +细胞的Xcl1 mRNA表达增加。在此时间点，罕见的浸润性CD8 + T细胞仅表达低水平的Xcl1 mRNA，且对照组和实验组无差异。
图3H，I：
图文描述：在植入后12天，对照组和Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤的NK细胞和T细胞中的细胞内CCL5蛋白。
结果分析：在Ptgs1 / Ptgs2- / -BRAFV600E肿瘤的NK和CD8 + T细胞中可检测到CCL5蛋白表达上升。
图3J：
图文描述：在植入后12天对肿瘤进行了分析，对细胞内Xcl1 mRNA表达进行定量。
结果分析：Xcl1 mRNA仍然很大程度上局限于NK细胞，并且没有任何T细胞（包括TRM）高表达。
图3K，L，M：
图文描述：分析来自MMTV-PyMT雌性小鼠乳腺肿瘤中免疫细胞产生的CCL5和Xcl1。显示细胞内CCL5蛋白和Xcl1 mRNA水平的代表性图。
结果分析：在mmtv-pymt小鼠自发发展的乳腺肿瘤中也有类似的观察。
图4A，B：
图文描述：WT小鼠，消耗掉NK细胞的WT小鼠，Rag1 -/-小鼠被皮下注射。用2x106个对照或Ptgs1 / Ptgs2 / BRAFV600E细胞，并在4天后分析CCL5蛋白和Xcl1 mRNA。
结果分析：WT和Rag1 -/-小鼠第4天Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤中CCL5蛋白水平相同，但在NK细胞耗竭的WT小鼠中CCL5蛋白水平和Xcl1 mRNA严重降低。
图4C，D：
图文描述：WT小鼠，Rag1 -/-和Rag2 -/- Il2rg -/-小鼠被皮下注射。用2x106个对照或Ptgs1 / Ptgs2- / -BRAFV600E细胞，并在4天后分析CCL5蛋白和Xcl1 mRNA。
结果分析：同样，在移植到Rag2- /- Il2rg- /-小鼠的Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤中检测到非常低的CCL5蛋白和Xcl1 mRNA水平。直接反应了NK细胞是CCL5以及Xcl1的来源。
图4E，F：
图文描述：将WT小鼠的脾脏NK细胞与IL-2一起培养，并在有或没有所示浓度的PGE2的情况下，用NK1.1激活剂刺激16小时。分析培养上清液中的CCL5蛋白和XCL1蛋白。
结果分析：NK1.1激活可诱导CCL5和XCL1分泌，并且PGE2以剂量依赖性方式大大降低了CCL5和XCL1分泌。
图4G：
图文描述：将WT小鼠的脾脏NK细胞与IL-2一起培养，并在存在或不存在所示浓度的PGE2的情况下，用NK1.1激活刺激16小时。使用碘化丙啶通过流式细胞术分析来分析NK细胞的存活。白色代表活细胞，黑色代表死细胞
结果分析：即使在白细胞介素2存在的情况下，PGE 2也显著降低了NK细胞的存活。
图4H，I：
图文描述：在存在或不存在所示浓度的PGE 2的情况下，用NK1.1激活刺激从Ptgs1 / Ptgs2- /- BRAFV600E肿瘤分离的NK细胞刺激16小时。分析培养上清液中的CCL5和XCL1蛋白。
结果分析：CCL5和XCL1水平说明与脾NK细胞相似，从肿瘤中分离出的NK细胞也容易受到PGE 2的抑制。
图4J：
图文描述：在肿瘤移植后第4天和第12天，BRAFV600E肿瘤中NK细胞上TIM-3和PD-1的表达。
结果分析：尽管PGE2对功能和存活有显着影响，但在体外或体内，NK细胞不会诱导共抑制受体TIM-3和PD-1的表达。
Fig4，XCL1和CCL5将cDC1的募集到肿瘤中以促进免疫控制；
图5A：
图文描述：cDC1向CCL5或XCL1的迁移。
结果分析：cDC1表达XCR1（XCL1的唯一受体）以及CCR1和CCR5，两者均结合CCL5。与这种表达模式相一致的是，体外培养的骨髓细胞产生的cDC1在Transwell检测中向ccl 5和xcl 1迁移。
图5B：
图文描述：cDC1在注射了抗CCL5和抗XCL1抗体或相应同种型匹配的对照的WT小鼠的Ptgs1 / Ptgs2 / BRAFV600E肿瘤中的蓄积。
结果分析：在体内阻断CCL5和XCL1导致肿瘤中CDC1的蓄积显著减少。
图5C，D，E：
图文描述：皮下注射后4天肿瘤内cDC1的定量，注射2 x106个过表达CCL5或XCL1或用空载体（EMPTY）转导的Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E细胞。将2x105个细胞移植到WT小鼠或Batf3- /-小鼠中。
结果分析：接种WT小鼠后四天，与EMPTY细胞形成的肿瘤相比，过表达CCL5或XCL1的Ptgs1 / Ptgs2 / BRAFV600E肿瘤中cDC1的积累显着增加。与EMPTY细胞相比，过表达CCL5或XCL1的Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤在WT小鼠中显示出加速的排斥反应。但在Batf3- /-小鼠中没有，说明了CCL5或XCL1是通过cDC1来起作用的。
图5F：
图文描述：在有或没有NK细胞耗竭的WT小鼠中，皮下移植2x105 EMPTY或XCL1的Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E细胞，观察肿瘤的生长。
结果分析：在NK细胞耗竭的小鼠中，过表达XCL1的Ptgs1 / Ptgs2- /- BRAFV600E肿瘤比EMPTY细胞生长得更慢。提示XCL1介导的cDC1的募集可以部分补偿NK细胞消融引起的肿瘤免疫控制的丧失。
图5G，H：
图文描述：将2x106个EMPTY或过表达的CCL5或XCL1的B16-OVA细胞皮下注射到WT小鼠中，4天后肿瘤内cDC1的定量，之后观察肿瘤生长。
结果分析：与Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤类似，过表达CCL5和XCL1的B16-OVA肿瘤（不产生PGE2）显示TDC内cDC1的积累增加。过表达CCL5和XCL1的B16-OVA肿瘤（不产生PGE2）显示肿瘤生长速度降低。
图5I：
图文描述：与（G）相同，但使用的是Ptgs2- / -CT26大肠癌细胞。
结果分析：在BALB / c小鼠中观察到由Ptgs2 -/- CT26大肠癌细胞形成的肿瘤也有类似趋势。过表达后，显示肿瘤内cDC1的积累增加。过表达CCL5和XCL1的Ptgs2 / CT26肿瘤显示肿瘤生长速度降低。说明CDC1-募集趋化因子CCL5和XCL1可以诱导TME内CDC1积累，提高肿瘤免疫控制。
Fig5，PGE2抑制了cDC1对趋化因子的反应；
图S5A,B：
图文描述：A移植2x106个COX充足的对照BRAFV600E黑色素瘤细胞EMPTY或过表达CCL5或XCL1的细胞。皮下注射4天后测定肿瘤内cDC1的定量。B 将2x105细胞移植到WT小鼠中，分别测量三组肿瘤大小。
结果分析：进一步研究CCL5或XCL1过表达是否还诱导了富含COX性肿瘤中的cDC1蓄积，绕过了PGE2介导的NK细胞抑制作用。在BRAFV600E肿瘤中，CCL5和XCL1的表达都不能挽救低的cDC1的丰度（图S5A），这些肿瘤的生长与WT小鼠的空转导细胞相似（图S5B）。
图S5C,D：
图文描述：与（A-B）相同，但使用CT26癌细胞。
结果分析：用COX-充足的CT26肿瘤过表达CCL5或XCL1进行了类似的观察。因此，单独的趋化因子表达不足以将cDC1募集到产生PGE2的肿瘤中，这表明PGE2不仅抑制NK细胞产生CCL5和XCL1，而且削弱cDC1对趋化因子的反应性。
图S5E,F：
图文描述：体外DC培养的CD103+ cDC1经流式细胞仪(FACS)分选，与来自COX-sufficient对照BRAFV600E黑素瘤细胞的PGE2 (100ng/ml)或条件培养基(CM)孵育16h，然后在体外测试向重组CCL5(E)或重组XCL1(F)迁移。
结果分析：与该观点一致，暴露于来自产生PGE2的肿瘤的条件培养基（CM）的cDC1向CCL5和XCL1的迁移受到阻滞。
图S5G,H：
图文描述：孵育期后，通过流式细胞术通过RT-PCR或XCR1表面蛋白分析Xcr1（G）或Ccr5（H）mRNA。
结果分析：此外，将cDC1与产PGE2的细胞中的CM或合成的PGE2一起孵育，会发现Xcr1和Ccr5 mRNA下调。
图S5I：
图文描述：E,F中cDC1上XCR1表面表达的流式细胞术分析。
结果分析：将cDC1与产PGE2的细胞中的CM或合成的PGE2一起孵育，会发现Xcr1蛋白下调。
图S5J：
图文描述：从对照或Ptgs1 / Ptgs2 -/- BRAFV600E肿瘤分离的肿瘤内cDC1上XCR1表面表达的流式细胞术分析。
结果分析：从BRAFV600E肿瘤中分离出的cDC 1也有XCR 1下调的现象。这些数据表明，PGE 2可阻断cDC 1向趋化因子CCL 5和XCL 1迁移的能力，其部分机制是通过下调相应的受体。
Fig6，人类癌症数据集的分析揭示了NK细胞，趋化因子和cDC1之间的密切相关性；
图6A：
图文描述：基于全局基因表达数据（来自GSE24759的数据集）分析38个人类造血细胞群中CCL5，XCL1和XCL2的表达。
结果分析：探查了XCL2，这是XCL1的旁系同源物，在人类中有，却没有在小鼠中发现，并且还以很高的亲和力结合XCR1。XCL1和XCL2均在NK细胞的CD56（通常称为CD56DIM）子集中表达。CCL5在CD56 -和CD56 + NK细胞以及其他免疫细胞群体（如效应和记忆CD8 + T细胞）中表达。
图6B：
图文描述：热图显示在人类TCGA数据集中XCL1，XCL2和CCL5转录水平之间成对计算的皮尔逊相关值，这些数据适用于皮肤皮肤黑色素瘤（SKCM，n = 460），乳腺浸润癌（BRCA，n = 1092），头颈部鳞状细胞癌（HNSC，n = 518）和肺腺癌（LUAD，n = 506）。
结果分析：我们观察到三种趋化因子XCL 1、XCL 2和CCL 5之间存在显著的正相关关系。与认为它们可能都是由相同的瘤内细胞类型所产生的观点一致。
图6C：
图文描述：不同肿瘤中TCGA数据集中趋化因子特征与NK细胞之间的相关性。
结果分析：我们在所有四个TCGA数据集中观察到两个基因特征之间的高度显着正相关。
图6D：
图文描述：基于全局基因表达数据（来自GSE77671的数据集），鉴定人DC子集中的cDC1特异性基因。
结果分析：分析了以前用作cDC1标记物的CCR7，THBD（CD141 / BDCA3），IRF8，ITGAE（CD103），FLT3和ZBTB46，但在分析中显示出混杂表达，无规律可循。
图6E：
图文描述：TCGA数据集中特定于cDC1和NK细胞的基因特征的相关性。
结果分析：在所有癌症类型中，cDC1特征与NK细胞的基因特征呈高度正相关。
图6F：
图文描述：TCGA数据集中趋化因子和cDC1基因特征的相关性。
结果分析：在所有癌症类型中，cDC1特征与趋化因子特征呈高度正相关。
图6G：
图文描述：热图显示TCGA数据集中指定特征基因的皮尔逊相关系数。
结果分析：三向相关性一直很重要，但在黑色素瘤和乳腺癌中最为明显。
Fig7.NK细胞和cDC1的基因特征与癌症患者的生存呈正相关。
图7A：
图文描述：热图显示黑色素瘤患者中NK细胞特异性基因的有序z转化表达值。分为NK细胞特征高和低两组。
图7B：
图文描述：TCGA数据集顶部和底部四分位数的NK细胞特征基因的表达。
结果分析：在所有癌症类型中，NK特征基因在肿瘤样品中的较高表达。
图7C：
图文描述：NK细胞标记对人类癌症患者总体生存率的最高和最低四分位数的预测价值。
结果分析：NK细胞特征基因与患者存活率显着相关，NK表达较高的患者预后较好。
图7D：
图文描述：热图显示了黑色素瘤患者中cDC1特异性基因的有序z转化表达值。
结果分析：同样，黑色素瘤中也分为cDC1高表达和低表达组。
图7E：
图文描述：表示的TCGA数据集的顶部和底部四分位数的cDC1特征基因的表达。
结果分析：四种肿瘤中，cDC1特征基因在肿瘤样品中的较高表达。
图7F：
图文描述：cDC1特征基因的最高值和最低值四分位数对癌症患者总生存期的预后价值。
结果分析：cDC1细胞特征基因与患者存活率显着相关，cDC1表达较高的患者预后较好。
图7G：
图文描述：CLEC9A表达水平的最高值和最低值四分位数对癌症患者总生存期的预后价值。
结果分析：值得注意的是，单个cDC1标记CLEC9A也可预后患者的生存，CLEC9A表达越高，预后越好。
图7H：
图文描述：比较cDC1和CD8 T细胞标志物的p值和危害比，以作为整体存活率的指标。
结果分析：四种肿瘤中，cDC1标记可以像CD8 T细胞信号一样有效地预测癌症患者的生存。
04
优缺点
优点：
1、这篇文章是生信研究、基础研究、动物实验结合的典型优秀文章，我们可以先从生信分析中提示出某种信息再进行基础研究。
2、全文逻辑清晰，思维全面，先后使用了多种小鼠模型以及肿瘤模型，阐述了一种肿瘤共有的特点，提示我们的研究可以不局限于肺癌。
3、作者关注了一种并不热门的免疫细胞，但是研究的非常深入。
缺点：
1、CD8+T细胞是否参与cDC1的调控，我们还未可知。
2、未涉及到临床药物及耐药方面的研究。
作者：钟舒鹏校审：吴钢
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