双特异性抗体又称双功能性抗体(Bi-specific antibodies,bsAbs),近些年在对抗肿瘤免疫治疗中的前景越来越被看好。其重要作用机制是通过两条抗原结合臂,一条与靶抗原结合,另一条与效应细胞上的标记抗原结合并激活效应细胞,介导免疫细胞杀伤肿瘤细胞的功能。
通过建立T细胞表面标记物和肿瘤细胞表面抗原间的联结,双特异性抗体克服了传统方法中的技术瓶颈。传统方法若想实现对肿瘤细胞的有效杀伤,必须识别与肿瘤细胞抗原-MHC I结合的T细胞,该T细胞群体扩增后方可实施杀瘤的功能【1】。
在双特异性抗体的开发中,特别是在先导物的功能验证阶段,Patient-Derived Xenograft (PDX)是最常用的模型工具。作为发挥杀瘤功能的效应细胞——肿瘤浸润白细胞(Tumor Infiltrating Leukocyte, TIL)在实体肿瘤内的成功浸润和克隆扩增是重要指征。
黑色素瘤与TIL
针对黑色素瘤内TIL的研究最为详实和充分,大量数据支持在黑色素瘤病理检验中,TIL的数量和克隆分布对潜在标记物开展免疫疗法的有效性预估和诊断标记物筛选都具有重要的参考意义,并已建立黑色素瘤中TIL的评估系统,包括诊断评分、预后评分、前哨淋巴结预测评分和迁移沉积评分等多项指标【2】。
对黑色素瘤中TIL不同亚群进行详细的定性和定量分析是预后评分的重要参考数据,如 CD69+细胞【3】, CD20+B 细胞【4】和granzyme B 表达的细胞毒性T细胞【5】的出现都被认为与好的预后密切相关;与此相反, FOXP3+Tregs细胞的出现则提示预后欠佳。
因此,针对PDX样品的优化解离工作流程并实现TIL的富集,为肿瘤免疫研究提供保障。
最优的样品保存是优质研究的起始
无论临床肿瘤样品还是PDX组织,经常遇到获取后需要进行转运甚至短暂保存的情景。
MACS Tissue Storage Solution (130-100-008)为肿瘤组织提供长达48小时的最优化保存支持:
有效维持组织内细胞活力
不引起细胞通路的异常激活
有效维持肿瘤组织内TIL的数量和克隆分布
高质量PDX单细胞悬液制备
保证下游TIL富集
Tumor Dissociation Kit, human (130-095-929)搭配gentleMACS Octo组织解离器提供针对多种组织来源肿瘤及肿瘤异种移植物(PDX)的经验证解离方案,并带来如下优势:
极其温和,有效维护细胞表面抗原信息完整 (>200种常见细胞表面抗原信息经过验证)
保持细胞活性和功能性;
稳定高效且一致性的解离方案;
B16-F10肿瘤内CD8+ TILs f得到完好保存。B16-F10小鼠肿瘤使用gentleMACS Octo,比较了是否使用Tumor Dissociation Kit, mouse的解离方案下,肿瘤内TIL的保留情况。流式分析图采用REAfinity™ 重组抗体系列。
人肿瘤解离试剂盒支持多种肿瘤的异种移植物(PDX)样品类型。
肿瘤浸润白细胞富集
MACS (TIL) MicroBeads系列专为精确富集肿瘤浸润白细胞而特别优化;搭配REAlease可释放的磁珠标记技术,为TIL亚型研究提供更灵活、更精确的实验方案。分离富集后的TIL可释放标记磁珠并进行二次标记分选,应用于如下研究:
肿瘤内Treg cell;
组织特异性记忆T细胞;
肿瘤内TCRγ/δ+ T cells
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